一种特异性靶向变异链球菌gtfB位点的CRISPR-B基因编辑方法及应用
本发明公开了一种特异性靶向变异链球菌gtfB位点的CRISPR?B基因编辑方法及应用，基因序列如SEQ ID ****所示；基因编辑方法包括以下步骤：步骤1：在基因序列前连接乳酸脱氢酶启动子Ldhp，形成Ldhp+CRISPR?B；步骤2：通过酶切和连接将Ldhp+CRISPR?B连接到线性质粒pDL278，形成CRISPR编辑载体；步骤3：通过聚合酶链式反应扩增敲除目的基因gtfB上游序列作为upstream；步骤4：通过聚合酶链式反应扩增敲除目的基因gtfC下游序列作为downstream；步骤5：将步骤3得到的upstream和步骤4得到的downstream连接形成同源重组模板HR?BC；步骤6：将步骤2得到的CRISPR编辑载体和步骤5得到的同源重组模板HR?BC转入变异链球菌中，即可实现同时编辑gtfB和gtfC；本发明可******程度抑制变异链球菌胞外多糖的合成和生物膜的形成。
