本发明提供了一种含有白酒发酵过程原料的己酸菌培养基，由大曲浸提液、乙酸钠、无水乙醇、酒尾、硫酸铵、尿素和黄泥浸提液组成；所述大曲浸提液的制备方法为：将大曲与水混合，超声1～3h，然后振荡10～14h，过滤，调节液相的pH值至7.0±0.2，通氮气煮沸除氧，灭菌；所述黄泥浸提液的制备方法为：将用于制作窖泥的黄泥与水混合，超声1～3h，然后振荡10～14h，过滤，通氮气煮沸除氧，灭菌。本发明还提供了上述己酸菌培养基在筛选高产己酸的己酸菌中的应用。本发明提供的己酸菌培养基在营养成分上更接近白酒酿造环境，有利于研究己酸菌的产己酸能力，并提高己酸菌在窖泥中的适应能力，还能促进窖泥老熟或改善窖泥性状。