本发明公开了一种基于聚集发光的双端互补核酸适配体探针，所述核酸适配体可特异性识别黄曲霉毒素B1，其核苷酸序列为序列表中SEQ ID NO：1所示，所述探针与上述核酸适配体双端互补，其核苷酸序列为序列表中SEQ ID NO：2所示。本发明所述黄曲霉毒素B1免标记均相检测方法，步骤如下：(1)制备探针?核酸适配体杂交反应液；(2)建立黄曲霉毒素B1浓度与荧光强度的标准曲线；(3)实际物质所含黄曲霉毒素B1的检测。使用本发明所述方法，不需对所述核酸适配体及探针进行标记，在均相溶液环境进行荧光检测，就可得到测试样品中所含黄曲霉毒素B1的浓度，因而可简化操作，缩短检测时间，降低检测成本。