本发明公开了一种主动靶向型基因递送纳米粒及其制备方法和应用；由阳离子聚合物、透明质酸和带负电荷的基因组成，阳离子聚合物与带负电荷的基因形成复合物内核，透明质酸通过电荷作用和化学键结合作用包覆于复合物内核表面，阳离子聚合物为PAsp(EDA)、PAsp(DET)、PAsp(TET)或PAsp(TEP)中的一种或者它们经化学修饰后的衍生物中的一种。本发明采用的透明质酸具有优良的生物相容性，不仅降低由阳离子聚合物引起的细胞毒性，同时能主动靶向作用于肿瘤细胞表面高度表达的透明质酸特异性受体，使外源性基因更加有效地递送到肿瘤细胞内，提高了细胞摄取和转染效率。