本发明涉及喜树碱前药凝胶及其制备方法和用途，属于医药领域。本发明提供了喜树碱前药凝胶，它是包含喜树碱前药、甲基丙烯酸、交联剂和引发剂的原料通过聚合制备得到的，其中，所述喜树碱前药的结构如式Ⅰ所示。本发明提供的基于PMAA的pH/氧化还原双响应性喜树碱前药凝胶，其粒径能够达到纳米级水平，具有良好的pH响应性能以及谷胱甘肽响应性能，能够在癌细胞中快速释放出活性成分喜树碱，实现靶向杀灭肿瘤细胞的作用。生物学实验证明，本发明喜树碱前药凝胶能够被肿瘤细胞成功摄取，对肿瘤细胞具有显著的抑制作用，在体内也显示出明显的抗肿瘤活性，具有广阔的临床应用前景。