本发明公开了一种针对水稻OsAGO17基因的人工microRNA干扰载体，该干扰载体以pre‑amiR‑OsAGO17159质粒和pHB质粒为原料，经过酶切和酶接处理并转化大肠杆菌感受态后得到。本发明中干扰载体的构建是先根据osa‑miR159a设计引物并以水稻为模板进行扩增；再筛选出特异靶向水稻OsAGO17基因的人工小分子RNA；然后合成相应引物并进行PCR扩增，用筛选出的amiRNA替换pre‑miR159a中成熟miR159a/miR159a*的序列，并转化大肠杆菌感受态，得重组质粒；最后对重组质粒和pHB质粒进行酶切和酶接处理，并转化大肠杆菌感受态，得人工microRNA干扰载体。