本发明公开了一种微环境响应型交联季铵盐胶束抗菌剂及其制备方法和应用，属于生物医学材料领域。所述交联胶束可以很好地穿透并集中在生物膜底部，在进入生物膜后交联胶束可以进行环境响应发生解离，得到季铵盐寡聚物，这些寡聚物通过多价杀菌可以实现优于单体的抗菌效果。此外，对于季铵盐来说自由长烷基链是产生毒性的主要原因，交联胶束得益于长烷基链稳定的束缚在空腔内，很好的改善了季铵盐的毒性。这种新型自治疗纳米抗菌剂优异的抗菌性及生物相容性使其具有良好的应用前景。