本发明属于组织诱导性生物材料制备技术领域，具体涉及一种软骨诱导性基质材料的制备方法与应用。本发明提供的软骨诱导性基质材料的制备方法是将小牛皮进行脱毛、分割、脱脂和脱重金属处理后；接着进行灭菌、酸浸泡、酶消化处理，得胶原液；最后将胶原液进行盐析、纯化、透析、中和，即得。采用本发明提供的软骨诱导性基质材料的制备方法制备得到的基质材料具有生物活性高，生物相容性好，生物可降解性和低抗原性的优点，使用该基质材料作为干细胞载体，诱导其成软骨分化可以实现软骨缺损的修复再生，也可以作为组织工程支架材料和软组织填充材料等。