本发明公开了一种猪病毒性腹泻多重RT‑PCR检测方法，涉及养猪疾病诊断技术领域，包括如下步骤：1)收集粪便样品，提取PEDV、TGEV、PoRVA、PKV、PAstV以及PDCoV共六种病毒的RNA且完成每一种RNA的反转录；2)设计步骤1)中六种病毒各自的引物组；3)制备步骤1)中六种病毒阳性质粒，具体包括如下步骤；a)回收目的基因片段；b)目的基因与载体pClone007的连接，得到连接产物；c)连接产物的转化，得到重组质粒；d)提取目标重组质粒；4)建立多重PCR扩增反应体系；具有特异性好，检测灵敏度高以及检测效果高的优点。