本发明公开了一种基于适配体固有构象诱导的检测黄曲霉毒素B1的方法，利用TAMRA荧光分子标记黄曲霉毒素B1（Aflatoxin B1,AFB1）的核酸适配体，并加入能特异性识别并嵌入DNA双链结构而发强光的EvaGreen分子，基于荧光共振能量转移（FRET）机制，通过核酸适配体分子对目标分子固有构象响应的变化，结合双链染料EvaGreen的荧光显色，对AFB1进行快速均相定量。本发明公开的方法只利用了核酸适配体的自身结构，避免了核酸探针的复杂设计，另一方面，所有反应在室温下的一个管内进行一次混合步骤即可，消除了分离和温度控制的步骤。该方法具有原理简单、成本低廉、灵敏度高以及选择性好等优点，对AFB1的检测限为0.32 ng/ml，并能对不同食品基质的样品进行检测，是具有竞争力的AFB1快速检测方法。