本发明公开了吉西他滨前药化合物、仿生纳米药物载体及其制备方法，将PEI先与还原性响应的前药链段反应，得到表面带有正电荷的，部分氨基被反应的PEI，然后将其再与带有醛基的磷酰胆碱链段反应，结束后装入MW=3500的透析袋中，透析2天，透析去除有机溶剂以及未反应的小分子，最后得到pH/GSH多层级响应的仿生纳米药物载体。本发明中的纳米微载体制备方法简单新颖，以及多层级的响应与之前报道过的药物载体比较，该载体键合的磷酰胆碱亲水链在肿瘤微酸环境下断裂，裸露出带正电荷的PEI，促进了细胞对于前药分子的内吞，前药分子进入癌细胞后，癌细胞中大量的GSH又进一步将前药中的二硫键分解，精准地控制药物的释放，实现药物的有效释放及肿瘤细胞的治疗。