本发明公开了一种检测禽腺病毒血清4型的引物组、试剂盒及其检测方法与应用，所述引物组包括外引物和内引物，其中外引物为F3和B3，内引物为FIP和BIP，所述F3的核苷酸序列如SEQ ID ****所示，所述B3的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；所述FIP的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，所述BIP的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示，所述FIP为5端生物素标记的序列，所述BIP为5端异硫氰酸荧光素标记的序列。本发明结合环介导等温扩增技术与横向流动试纸条技术，针对FAdV‑4重要的因子52k基因设计一套引物，建立FAdV‑4的LAMP‑LFD快速检测技术，本发明提供的LAMP‑LFD试剂盒操作简便，安全可靠、灵敏高效、特异性好，特别适合于现场快速可视化检测。