本发明公开了一种TNF‑α的高敏Elisa检测试剂盒及其使用方法与应用，属于生物医疗检测技术领域。Elisa检测试剂盒包括：包被有TNF‑α捕获抗体的酶标板、TNF‑α检测抗体、TNF‑α抗体标准品、亲和素‑辣根过氧化物酶、ECL试剂、PBS缓冲液、清洗液、封闭液及样品稀释液；本试剂盒及使用方法与应用基于利用ECL具有敏感度高等特点，将其用于TNF‑α抗体的ELISA荧光检测，有效提高TNF‑α抗体在Elisa检测试剂盒中最低检测限，使之适用于临床待检样本量低或TNF‑α含量低的样本检测；同时，保证本检测试剂盒能有效的提高检测灵敏度及检测限。