本发明公开了一种检测沙门氏菌并鉴别鸡白痢/鸡伤寒血清型的双重PCR引物、试剂盒、应用和方法；所述双重PCR引物包括用于沙门氏菌检测的STN引物组和用于鸡白痢/鸡伤寒检测的SEP引物组；所述STN引物组包括引物STN‑F和引物STN‑R；所述SEP引物组包括引物SEP‑F和引物SEP‑R；所述试剂盒包括所述的双重PCR引物；所述双重PCR检测方法包括步骤：模板DNA制备：提取待测样品DNA；双重PCR扩增：利用双重PCR引物的引物STN‑F、引物STN‑R、引物STN‑F和引物STN‑R进行双重PCR扩增；扩增产物的琼脂糖凝胶电泳检测及判断。本发明实现了一次PCR中检测沙门氏菌并同时鉴别鸡白痢/鸡伤寒血清型，优化后的双重PCR方法具有特异性良好的特点。