本发明提供了一种检测人体血浆自体荧光光谱的特征峰、并结合多变量统计分析方法进行肺结核疾病诊断的方法及其应用，包括以下步骤：采集受试者的空腹静脉血液，离心处理分离出血浆，使用荧光分光光度计测量血浆的自体荧光光谱，对测得的荧光光谱进行二阶导数处理、根据其特征峰初步筛查肺结核病患者，利用多变量统计分析方法处理荧光光谱数据获得与肺结核疾病特征对应的得分数据、将得分数据与自建数据库中的判别参数或判别方程进行比对，诊断出受试者是否患肺结核疾病。本发明所提出的检测方法采样方便，检测快速，诊断灵敏度、特异性及准确度高，成本低，可为肺结核疾病的诊断提供一种新型的检测方法，具有重要的社会经济价值及临床应用价值。