本发明公开了一种结核分枝杆菌复合群快速检测试剂盒，包括鉴别试剂，所述的鉴别试剂包括十对引物中的至少一对与十条探针中的至少一条；本发明还提供了一种结核分枝杆菌复合群快速检测试剂盒的制备方法，包括以下步骤：S1根据基因库比对结核分枝杆菌复合群基因序列设计各个引物和探针；S2构建出结核分枝杆菌复合群的试剂盒程序；S3针对试剂盒程序的特异性和灵敏性试验；S4对建立的试剂盒程序进行多次重复试验；S5制备标准目的基因池；S6构建高灵敏度的特异性检测试剂盒；本发明的有益效果是：利用本发明所提供的基于特异性引物对和探针的试剂盒，可达到快速、全面检测鉴别结核杆菌，为后面的全面检测提供可能性；利用灵敏性测试、特异性测试和重复性测试，同时对比CT差值，达到快速准确检测。