本发明公开了一种引物组及其在构建G5型猪轮状病毒的重组杆状病毒样颗粒中的应用，其中第一引物的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，第一引物的下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示，第二引物的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示，第二引物的下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示；第三引物的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示，第三引物的下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:6所示；集中于同一病毒样颗粒中可表达式可以同时表达，具有多亚基蛋白结构，且其保留了自组装的能力，没有遗传物质，但模仿了天然病毒颗粒的整体结构且没有传染性。