本发明公开了一种草地贪夜蛾种特异性引物对及试剂盒和鉴别方法，该草地贪夜蛾种特异性引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示。本发明基于线粒体DNA COⅠ基因开发的草地贪夜蛾的种特异性引物，利用草地贪夜蛾、斜纹夜蛾、甜菜夜蛾、粘虫和玉米螟5种鳞翅目昆虫对草地贪夜蛾的种特异性引物对进行种特异性检验，进一步建立种特异性引物与线粒体COⅠ基因通用引物的多重PCR反应体系，以COⅠ通用引物的扩增产物作为PCR反应的内对照，用于检测所检测材料中是否存在可供检测的DNA，为草地贪夜蛾的快速识别与疫情监控提供技术手段。