本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种在肌源性细胞特异性高表达SIA的重组表达载体及其应用。所述重组表达载体启动子为PEMS，其核苷酸序列如SEQ ID ****所示；编码SIA的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明使用柔性肽(GGGGS)3替代C肽对胰岛素原进行改造，获得了高活性单链胰岛素类似物SIA，采用增强型肌肉特异性启动子PEMS调控SIA的表达，实现了高活性单链胰岛素类似物SIA在骨骼肌细胞中特异性高效表达并分泌出胞外进入血液循环系统，既可以达到有效降血糖的效果，又同时避免异位表达产生不必要的副作用。本发明所述重组表达载体可用于制备治疗I型糖尿病的药物。