本发明提供了一种利用多重PCR检测多种胰腺癌肿瘤标记物的方法及检测用引物和探针。该方法包括以下步骤：(1)设计引物和探针：P53上下游引物序列和P53探针序列分别见SEQ ID No:1、2和3；Claudin?4上下游引物序列和Claudin?4探针序列分别见SEQ ID No:4、5和6；(2)提取胰腺组织总RNA；(3)RNA浓度及纯度鉴定；(4)去除DNA；(5)real?time PCR。通过设计特异性引物和探针，优化多重PCR条件，建立利用多重PCR检测多种胰腺癌肿瘤标记物的方法，该方法特异性好，灵敏度高，结果数据可靠，重复性强，与单个检测相比，可节约成本和时间。
