本发明属于法医遗传学领域，具体涉及基于165个Y?SNP的法医学二代测序试剂盒。本发明要解决的技术问题是使用二代测序技术，利用Y?SNP遗传标记对未知来源的中国男性生物学检材在Y染色体进化树上的位置进行高分辨率划分，以推断其男性血统来源。本发明的技术方案是基于165个Y?SNP遗传标记的法医学二代测序试剂盒，包括用于复合扩增的165对引物的混合物，使同时检测165个Y?SNP成为现实。本发明试剂盒应用了单管内复合扩增和二代测序技术，可一次性获得多个生物性检材的165个Y?SNP遗传标记的基因分型，并推断中国群体来源的男性样本的地理、民族甚至是家系来源。