本发明属于结核病疫苗领域，具体涉及一种抗结核病疫苗及其制备方法和用途。针对现有疫苗对成人效果不佳；或不适合免疫力低下病人等问题，本发明提供一种抗结核病疫苗的制备方法：先获取分枝杆菌单细胞菌体，再采用射线低剂量、间断、循环辐照单细胞菌体，得到分枝杆菌疫苗，射线为X射线、γ射线或同位素放射源Co60产生的射线，辐射剂量率采用10～20Gy/min，每照射20min间隔5～10min，照射8～10次。本发明不仅完整地保留菌体的所有抗原特性，还可更迅速地激发更强的特异性免疫应答，获得有效持久的免疫力。制备的疫苗毒性低，起效快，更安全可以用于免疫不全者的预防及治疗结核病。