本发明提供了一种基于脂肪酶多步嵌入的无表面活性剂动物皮脱脂方法。该方法的特点是，结合制革工艺准备工段中各工序pH值的变化特点，基于制革工艺整体设计，将脂肪酶的应用多次嵌入到预浸水、脱脂、复浸水、浸灰、脱灰、软化等主要工序前期，催化动物皮内油脂水解，然后将pH值调整到各工序的常规要求，使水解产生的脂肪酸原位形成可溶性皂，进入水相，促进脂肪酶对油脂的催化水解，同时将未水解的油脂乳化，有效提高脱脂效率，皮内油脂去除率高达90%，实现制革过程中的无溶剂和无表面活性剂高效脱脂，COD排放量降低28%以上，废水排放量降低19%左右，能耗降低252,000‑285,600kg/t盐湿皮。本发明的方法适合以动物皮为原料的生产过程中对动物皮进行高效脱脂。