一种双标记快速响应核酸适配体探针，该探针由5’端、3’端分别被荧光显色基团标记的核酸适配体和5’端、3’端分别被荧光淬灭基团标记的互补探针组成，该核酸适配体为可特异性识别黄曲霉毒素B1的核酸适配体核，即AFB1核酸适配体，其核苷酸序列为序列表中SEQ ID NO：1所示，该互补探针与AFB1核酸适配体双端互补，其核苷酸序列为序列表中SEQ ID NO：2所示。使用本发明所述方法可对黄曲霉毒素B1快速检测，其加入黄曲霉毒素B1后的识别过程可在一分钟完成，并且一个黄曲霉毒素B1分子可引发两个荧光基团信号的恢复，灵敏度高，整个反在均相和恒温的溶液环境中进行，操作简单。