本发明公开了一种细胞外基质修饰的多层软组织修复材料，它是由聚氨酯粘接的细胞外基质修饰的双层复合材料；本发明还公开了此多层软组织修复材料的制备方法和用途。本发明通过水性聚氨酯乳液将SIS膜和PU/SIS复合材料牢固的粘接在一起，形成多层软组织修复材料，其中，PU/SIS复合材料作为肌层，对SIS膜层起支撑作用，SIS膜作为内膜层，更利于细胞的粘附与生长，可促进软组织的修复。同时，本发明制备的细胞外基质修饰的多层软组织修复材料可促进尿源性干细胞向特定的细胞分化，说明本发明制备的修复材料具有一定诱导细胞分化的活性。本发明制备的修复材料不仅有望用于构建各种病理或生物学研究的软组织模型，还有望为软组织的缺损修复提供新的方法和思路。