本实用新型公开一种活体动物显微成像固定装置，包括底板、固定台、吸附板，固定台与底板连接，固定台顶部设有空腔，空腔内设有若干个分段，若干个分段的下方均设有调节螺柱，调节螺柱与底板螺纹连接，调节螺柱上端与分段底部接触，固定台顶部设有沿固定台前后方向的凹槽，凹槽贯穿若干个分段的顶部、固定台的前端与固定台的后端，凹槽垂直于若干个分段，吸附板与固定台顶部滑动连接，吸附板顶部设有第一通孔，第一通孔位于空腔的上方，第一通孔的侧壁设有若干个通气孔，若干个通气孔均与负压装置连接，吸附板上表面设有盖玻片，第一通孔位于盖玻片下方；本实用新型可以获得稳定度高、清晰度高的显微图像。