本发明提供了一种低成本、简单快速的糖蛋白N‑糖链定量分析方法，它包括如下步骤：(1)糖蛋白加热变性后进行还原烷基化处理；(2)在超滤管中使用PNGase F蛋白酶切除糖肽上的N‑糖链，离心收集N‑糖链；(3)使用亲水作用色谱纯化富集N‑糖链；(4)去除唾液酸后，干燥浓缩；(5)基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱分析N‑糖链。本发明操作简单、快速，可广泛适用于不同来源的糖蛋白的N‑糖链的分析，分析结果稳定可靠，应用前景广。