本发明提供了一种鸡白痢沙门氏菌检测试剂盒，它包含：鸡白痢沙门氏菌特异引物、PCR缓冲液、PCR enhancer、dNTP、DNA聚合酶Tfl和DNA聚合酶KOD；所述鸡白痢沙门氏菌特异引物的序列如SEQ ID ****1‑12所示；所述PCR缓冲液含有200‑260摩尔份的Tris‑HCl、4‑8摩尔份的MgCl2、50‑120摩尔份的(NH4)2SO4、90‑110摩尔份的KCl和1‑3体积份Triton X‑100；当所述KCl的量90‑110mmol时，所述Triton X‑100的量为1‑3ml。本发明还提供了对应的使用方法，对应的聚合酶Tfl和DNA聚合酶KOD的用量比例为(1‑30):1。本发明能特异、灵敏地检测鸡白痢沙门氏菌以及其他沙门氏菌，在禽类疾病防控上具有良好的应用前景。