本发明提供了一种检测角蛋白酶活力的酶谱方法，在角蛋白底物处理、制胶、电泳及水解条带显色步骤做了改进，包括(A)将10g角蛋白底物和500ml有机溶剂加入回流冷凝装置中，于80‑100℃消煮60‑100min；用两倍体积经4℃预冷的丙酮沉淀角蛋白；离心收集角蛋白沉淀，清洗后于4℃晾干；(B)在制备分离胶时，加入由(A)处理所得角蛋白底物，使得其质量百分含量为0.1％，然后于室温下以100r/min的速度搅拌1h，离心取上清，进行配置质量浓度为12％的分离胶。本发明克服了传统酶谱方法底物特异性低、水解条带区分度低、灵敏度低等局限，提供了一种准确、灵敏的检测角蛋白酶活力的酶谱方法。