本发明属于基因检测技术领域，具体涉及一种甲状腺癌相关58基因检测试剂盒及其使用方法。针对现有试剂盒使用范围窄、检测灵敏度低等问题，本发明提供了一种甲状腺癌相关58基因检测试剂盒，其包含核苷酸序列如SEQ ID NO：1‑SEQ ID NO：869所示的引物。本发明还进一步提供了该试剂盒的使用方法，本试剂盒能够检测与甲状腺癌分子分型、治疗敏感性、抗拒性、遗传性相关多个方面的基因突变，检测范围广，灵敏度高，低成本，检测方法简单，适宜推广使用。