本发明公开的一种原位同时测定培养基中四价、五价钒含量的方法，用于研究牛肉膏蛋白胨液体培养基中微生物对四价钒的氧化作用和对五价钒的还原作用强度。该方法通过调整培养基配方，建立了显色反应体系（包括反应试剂量、添加顺序、显色时间及其他条件），利用分光光度法，比较微生物作用前后培养基的吸光度曲线的变化，实现了培养基中四价、五价钒的原位同时测定。该方法具有设备要求低，操作简单、测定准确，重现性好等特点，特别适合定性定量研究微生物对钒的氧化还原能力。