本发明提供了一株耐乙醇耐高糖的发酵菌株，所述发酵菌株为SEB12，分类命名为酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae，其保藏编号为CGMCC No.18216，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。本发明还提供了一种上述耐乙醇耐高糖的发酵菌株的构建方法。在乙醇葡萄糖共发酵、高糖或高温情况下，本发明的发酵菌株SEB12的乙醇发酵速率相对于出发菌株较高，说明所述菌株具有耐高糖、耐高乙醇的优势，对实现非粮生物质乙醇化工业化生产具有重要意义。